糖蛋白染色試劑盒
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產(chǎn)品編號
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規(guī)格
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運輸
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RTD6501
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10次
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RT
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● 產(chǎn)品簡介：
本產(chǎn)品用于PAGE 凝膠或蛋白免疫印記硝酸纖維素膜上糖蛋白的檢測。整個染色2.5小時完成。染色后的糖蛋白為品紅色條帶，背景為淺粉色或者無色。該試劑盒檢測的靈敏度一般可以達(dá)到微克級別，但實際靈敏度跟靶蛋白糖基化程度相關(guān)，可以用于 SDS-PAGE 和2D電泳的凝膠檢測，也可以用于瓊脂糖凝膠電泳的檢測（但背景較高），還可以用于硝酸纖維素印跡膜的檢測。
按照每次使用25 ml糖蛋白染色試劑計算，本產(chǎn)品可以染色 8-10塊mini-PAGE（8×10cm）膠或印跡膜。
● 產(chǎn)品組成：
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產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貯存
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運輸
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RTD6501-1
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氧化試劑
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2.5 g
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常溫避光
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RT
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RTD6501-2
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糖蛋白染色試劑
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250 ml
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常溫避光
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RT
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RTD6501-3
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還原試劑
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1.25 g
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常溫避光
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RT
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RTD6501-4
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陽性對照（辣根過氧化物酶）
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1 mg
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-20℃
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RT
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RTD6501-5
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陰性對照（大豆胰蛋白酶抑制劑）
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1 mg
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-20℃
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RT
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PL080
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5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液
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1 ml
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-20℃
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RT
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250ml棕色塑料瓶
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2個
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說明書
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1份
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● 儲存條件
按照標(biāo)簽溫度貯存，常溫運輸。開封后一年有效。
●實驗前準(zhǔn)備：
1.
配制 3%醋酸溶液：將 15 ml 自備的冰醋酸與 485 ml 超純水混勻，常溫保存?zhèn)溆谩?
2.
配制 50%甲醇溶液：將 250 ml 甲醇與
250 ml 超純水混勻，常溫保存?zhèn)溆谩?
3. 配制氧化試劑溶液： 將本試劑盒提供的氧化試劑干粉轉(zhuǎn)移到本試劑盒提供的250ml空塑料瓶中， 然后加入250
ml的超純水，充分混勻溶解后得到氧化試劑溶液，常溫保存?zhèn)溆谩?
4. 配制還原試劑溶液： 將本試劑盒提供的還原試劑干粉轉(zhuǎn)移到本試劑盒提供的
250ml 空塑料瓶中，然后加入 250 ml的超純水，充分混勻溶解后得到還原試劑溶液，常溫保存?zhèn)溆谩?
5. 配制1×SDS-PAGE上樣緩沖液：取0.4
ml 5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液，加入1.6
ml超純水，-20℃貯存?zhèn)溆谩?
6. 配制陽性對照（辣根過氧化物酶）溶液：向裝有
1 mg 辣根過氧化物酶固體的棕色管中加入 1 ml 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液，所得辣根過氧化物酶溶液的濃度即為
1mg/ml，然后適量分裝成8-10管， 留下一管當(dāng)天使用， 其余的放-20℃長期保存。 對于
8×10 cm的凝膠來說，每條泳道加
10 μl 的陽性對照溶液即可，上樣前95℃處理5分鐘。
7. 配制陰性對照（大豆胰蛋白酶抑制劑）溶液：向裝有
1 mg 大豆胰蛋白酶抑制劑干粉的管中加入 1×SDS-PAGE
上樣緩沖液（自備），所得大豆胰蛋白酶抑制劑溶液的濃度即為 1 mg/ml，然后適量分裝成8-10管， 留下一管當(dāng)天使用，其余的放-20℃長期保存。對于
8×10 cm的凝膠來說，每條泳道加
10 μl 的陽性對照溶液即可，上樣前95℃處理5分鐘。
8. 樣品稀釋：用 5×MonoClolor 蛋白上樣緩沖液將樣品濃度稀釋為
1 mg/ml，SDS-PAGE 上樣緩沖液終濃度為
1×。對于 8×10 cm的凝膠來說，每條泳道加 5-10 μl 的樣品即可，上樣前95℃處理5分鐘。。
● 凝膠染色的操作步驟（膜染色從步驟3開始）：
注意事項：
1.以下步驟僅針對0.75mm厚度大小8×10cm的凝膠，1-1.5mm厚度凝膠或更大體積凝膠適當(dāng)增加液體體積并延長操作時間。
2. 請在通風(fēng)櫥中進(jìn)行以下操作。
一. 固定：
取出電泳后的 SDS-PAGE 凝膠，在50 ml 50%甲醇溶液中，搖床慢搖30分鐘，棄甲醇溶液。
二. 漂洗：
50 ml超純水洗滌凝膠兩次，每次搖床慢搖10分鐘，棄超純水。
三. 氧化：
凝膠中加入 25 ml 氧化試劑，搖床慢搖15分鐘，棄溶液。
四. 漂洗：
50 ml超純水洗滌凝膠3次，每次搖床慢搖5分鐘，棄溶液。
五. 染色：
凝膠中加入25 ml糖蛋白染色試劑，搖床慢搖15 分鐘，糖蛋白會在5-10分鐘內(nèi)顯現(xiàn)品紅色。若檢測的糖蛋白含量較低，適當(dāng)延長顯色時間。棄染色溶液。
注：若糖蛋白染色試劑中有晶體析出，只需取上清液即可，不要加熱溶解晶體。
染色步驟會產(chǎn)生有刺激性氣味氣體，請在通風(fēng)櫥中操作。
六. 還原：
凝膠中加入 25 ml 還原試劑，搖床慢搖15分鐘，棄溶液。此時凝膠背景略帶紅色。
七. 漂洗：
加入50 ml 3%醋酸溶液搖床慢搖洗滌膠塊3次，每次10分鐘，直至膠背景紅色變淺，接近淡紅色或無色，此時紅色糖蛋白主帶清晰可見。
八. 保存：
膠塊保存在50 ml 3%醋酸溶液中。
● 實驗記錄表格
實驗日期：
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編號
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步驟
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體積
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時間
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凝膠尺寸 8×10 cm
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0.75mm膠或膜
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1
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固定
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50 ml
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30 min
膜從步驟3開始
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2
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漂洗
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2×50 ml
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2×10 min
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3
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氧化
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25 ml
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15 min
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4
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漂洗
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3×50 ml
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3×5 min
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5
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染色
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25 ml
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15 min或更長
條帶變?yōu)槠芳t色
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6
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還原
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25 ml
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5 min
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7
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漂洗
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3×50 ml
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3×10 min
漂洗后凝膠背景變淺
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8
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保存
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50 ml
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實驗示例：
蛋白轉(zhuǎn)到NC膜后糖蛋白染色
使用RTD6501 糖蛋白染色試劑盒發(fā)表部分文章列表（6篇）：
1. [IF=8.947] Adhesive
property and mechanism of silkworm egg glue protein.
Author: Yutian Lei, Kaiyu Guo, Yan Zhang, Xiaolu
Zhang, Lixia Qin, Xin Wang, Hongtao Zhu, Yuanyuan Guo, Wenxin Yang, Benchi Li
Qingyou Xia, Ping Zhao, Zhaoming Dong
Journal: Acta Biomaterialia. Volume 134, 15 October 2021, Pages 499-512
Institution： Southwest University
Paper link：https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1742706121004773
2. [IF=8.2] Conjugation
of dual-natural milk-derived proteins with fucoidan to preparecontrollable glycosylation
products via dielectric barrier discharge cold plasma.
Author: Shuangshuang Wang, Yi Ding, Zhenquan Huo, Jiaming Li, Jiaqing Song,
Weiwen Jian,Qinyi Gao, Minghui Zhang, Lili Zhao, Jing Zhang, Jiaying Zhang,
Wupeng Ge.
Journal: International Journal of Biological
Macromolecules. 255 (2024)
128035
Institution： Northwest
A&F University
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.128035
3. [IF=6.1] Inhibiting
Protein Aggregation Using Cellulose Nanocrystal in MALDI-TOF MS Analysis:
Improving the Sensitivity and Repeatability of Intact Protein in Pueraria.
Author: Shan L,Huang Y ,Zhang J ,Su Y,Guo Y.
Journal: Journal of Agricultural and Food Chemistry, 07 Dec 2023, 71(50):20146-20154
Institution：Shanghai
Institute of Organic Chemistry, Chinese Academy of Sciences
Paper link：https://doi.org/10.1021/acs.jafc.3c04650
4. [IF=3.3] Similar
construction of spicules and shell plates: Implications for the origin of
chiton biomineralization.
Author: Haipeng Liu, Chuang Liu, Wenjing Zhang, Yang Yuan, Zhenglu Wang,
Jingliang Huang
Journal: Journal of Proteomics 296 (2024) 105126
Institution：Hohai University，Sichuan University
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.jprot.2024.105126
5. [2023 IF=4.8] Regulatory
effects of yam (Dioscorea opposita Thunb.) glycoprotein on energy metabolism in C2C12 and 3T3-L1 cells and on
crosstalk between these two cells.
Author: Weiye Li, Jian Shi, Xueping Wu, Hongyong Qiu, Chunhong Liu
Journal: Journal of Ethnopharmacology 338 (2025) 119013
Institution：College of Food
Science, South China Agricultural University
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.jep.2024.119013
6. [2023 IF=4] Achieving
thermostability of a phytase with resistance up to 100 ℃.
Author: Tao Tu, Qian Wang, Ruyue Dong, Xiaoqing Liu, Leena Penttinen, Nina
Hakulinen, Jian Tian, Wei Zhang，Yaru Wang, Huiying Luo, Bin Yao,
and Huoqing Huang
Journal: J. Biol. Chem. (2024) 300(12) 107992
Institution：State Key
Laboratory of Animal Nutrition and Feeding, Institute of Animal Sciences
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.jbc.2024.107992